Implementación del modelo para caracterización de Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis (T24001) en el contexto de cáncer de cuello uterino

López Pazos, Silvio Alejandro | 2020

RESUMEN Varias cepas de la bacteria entomopatógena Bacillus thuringiensis han sido descritas con actividad citotóxica sobre células cancerosas en cultivo in vitro, incluyendo líneas HeLa, MOLT-4, y Jurkat entre otras. Esta actividad se ha asociado a una clase de proteínas denominadas parasporinas (PS), las cuales pertenecen al grupo de proteínas insecticidas Cry, Estas PS generan apoptosis en células cancerígenas. En este proyecto se implementó un modelo in vitro para cultivo de células de cáncer de cuello uterino, junto con la caracterización de la cepa B. thuringiensis serovar neoleonensis (T24001), que tiene actividad citotóxica contra la línea tumoral de células T de leucemia (MOLT-4). Con esto en mente, la cepa de trabajo se caracterizó por microscopia de luz y de contraste de fases, se le realizó prueba de sensibilidad a antibióticos (ampicilina, tetraciclina y gentamicina), y finalmente se extrajo purificó cristales parasporales de B. thuringiensis serovar neoleonensis (T24001), los cuales se cuantificaron mediante el método de Bradford, luego se determinó presencia de las proteínas correspondientes en electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), y poder visualizar la presencia de posibles PS. Para el cultivo de células de cáncer de cuello uterino se usaron las líneas HeLa y SiHa provenientes de tejido tumoral de cáncer de cuello uterino, con el fin de obtener un modelo estable, constante y reproducible, donde se utilizaron viales que contenían las células en medio de congelación (suero fetal bovino + dimetil sulfuro), las cuales se cultivaron en medio DMEM-High y se incubaron a 37°C en atmosfera de CO2. Estas células se observaron desde las 24 horas con microscopio invertido para determinar confluencia celular de 90%, óptima para ensayos de viabilidad celular mediante el ensayo Tripan Blue, encontrando que las células HeLa son más resistentes a la manipulación que las células SiHa, al utilizar concentraciones celulares conocidas desde 5000 células/ml hasta 40000 células/ml en pruebas de cuatro días, que sean útiles para futuros ensayos de 10 citotoxicidad. Este trabajo aporta al área de determinación de PS como posible agente anticancerígeno gracias a su actividad específica contra células tumorales, y su inocuidad hacia células de tejidos sanas.