Identificación de trampas extracelulares de neutrófilos-nets en pacientes con síndrome post-covid

Numpaque Morales, Laura Ximena

Publicación:
Identificación de trampas extracelulares de neutrófilos-nets en pacientes con síndrome post-covid

dc.contributor.advisor	Monsalve Carmona, Diana Marcela
dc.contributor.advisor	Ramírez Santana, Carolina
dc.contributor.advisor	Duarte Torres, Yurany
dc.contributor.author	Numpaque Morales, Laura Ximena
dc.date.accessioned	2026-05-06T19:11:15Z
dc.date.issued	2025-04-25
dc.description.abstract	Los neutrófilos desempeñan un papel crucial en la respuesta inmunitaria innata contra patógenos. Esta célula reconoce patrones moleculares asociados a patógenos (PAMps) o daño celular (DAMPs). Como mecanismos de defensa emplea la fagocitosis, la liberación de especies reactivas de oxígeno (ROS), la liberación de trampas extracelulares de neutrófilos (NETs) entre otros mecanismos. La NETosis, es un proceso de muerte celular programada que implica la liberación del ADN celular, histonas y proteínas antimicrobianas como la Mieloperoxidasa (MPO) y la elastasa neutrofílica al espacio extracelular con el fin de contribuir a la defensa del hospedero. Sin embargo, se ha asociado con patologías inflamatorias como el COVID-Agudo y el Síndrome post-COVID (SPC). Este estudio descriptivo longitudinal comparó tres grupos de pacientes, clasificados como COVID-19 agudo (n=35), SPC (n=35) y controles pre-pandémicos (n=35). Se analizaron específicamente los niveles séricos de complejos MPO-ADN (considerados como un marcador de NETs) mediante ELISA y la capacidad inductora de NETs del suero de cada grupo en neutrófilos sanos in vitro. Los resultados mostraron que tanto los pacientes con COVID-19 agudo como aquellos en fase de SPC presentaron niveles significativamente más elevados de complejos MPO-ADN en comparación con los controles pre-pandémicos (p<0,05), sin diferencias significativas entre las fases aguda y post-COVID de los mismos pacientes. Adicionalmente, el suero de pacientes con SPC demostró una mayor capacidad inductora de NETosis ex vivo en comparación con los controles pre-pandémicos, mientras que, en relación con su fase aguda de COVID-19, se observó una tendencia al aumento que no alcanzó significancia estadística.	spa
dc.description.degreelevel	Pregrado
dc.description.degreename	Bacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico
dc.description.tableofcontents	TABLA DE CONTENIDOS RESUMEN 8 INTRODUCCIÓN 10 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 10 1.1 Pregunta Problema 11 2. JUSTIFICACIÓN 11 3. OBJETIVOS 12 3.1 Objetivo General 12 3.2 Objetivos Específicos 12 4. ANTECEDENTES 13 5. MARCO TEÓRICO 17 5.1 NETs y NETosis 17 5.2 SARS-CoV-2 20 5.3 COVID-19 23 5.3 Síndrome Post-COVID 24 6. METODOLOGÍA 26 6.1 Tipo de investigación 26 6.2 Enfoque de la investigación 26 6.3 Población y muestra 26 6.4 Selección de muestras 27 6.5 Muestras biológicas 28 6.6 Hipótesis 28 6.7 Variables 29 6.8 Análisis estadístico 29 7 RESULTADOS 30 7.1 Protocolo de estandarización: Purificación de neutrófilos humanos 30 7.2 Preparación de un control interno para la detección de NETs mediante ELISA (Stock de NETs) 34 7.3 Cuantificación de complejos MPO-ADN a través de ELISA 35 7.4 Inducción de NETosis in vitro e identificación por IFI 37 7.6 Características clínicas de los pacientes 39 7.7 Detección y cuantificación de NETs en suero de pacientes COVID-19, SPC y controles sanos pre-pandémicos 40 9 CONCLUSIÓN 46 10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 47 11. Anexos 52 11.1 Protocolo de aislamiento de neutrófilos por gradiente - Proyecto NETs CREA 52 11.2 Stock de NETs para control de ELISA 60 11.3 Protocolo para el montaje de Elisa MPO-ADN/POD 64 11.4 Protocolo para Estimulación de trampas extracelulares de neutrófilos – Proyecto NETs CREA 75 11.5 Protocolo para Inmunofluorescencia para NETs – Proyecto NETOSIS 80 11.6 Características sociodemográficas y clínicas de los pacientes 89 11.7 Fotografías de Inmunofluorescencia indirecta 93 11.8 Comité de ética en investigación de la universidad del Rosario 94 Índice de Ilustraciones Ilustración 1: Proceso de NETosis lítica o suicida (22) 18 Ilustración 2: Proceso de NETosis no lítica (22) 19 Ilustración 3: Ingreso del SARS-CoV-2 a la célula del huésped (26) 21 Ilustración 4: Infección por SARS-CoV-2 y NETosis (4) 22 Ilustración 5: Plasma rico en leucocitos, Autoría Propia 31 Ilustración 6: Sobrenadante rico en leucocitos con Ficoll 31 Ilustración 7: Gradiente de densidad por Ficoll 32 Ilustración 8: Lisis de eritrocitos con ACK, Autoría Propia 33 Ilustración 9: Aislamiento celular en 10X, Autoría Propia 34 Ilustración 10: Aislamiento celular en 40X, Autoría Propia 34 Ilustración 11: Células estimuladas con PMA, Autoría propia 35 Ilustración 12: Células sin estimular, Autoría Propia 35 Ilustración 13: Medición de biomarcadores séricos asociados a NETs 40 Ilustración 14: Análisis de Género asociado a la formación de NETs 41 Ilustración 15: Inducción de NETosis en neutrófilos sanos por suero de pacientes con COVID-19 agudo, SPC, Pre-pandémicos 42 Ilustración 16: Inducción de NETosis en neutrófilos sanos por suero de pacientes con COVID-19 agudo, SPC, Pre-pandémicos y controles para IFI indirecta 42 Ilustración 17: Imagen de referencia del procedimiento de centrifugación después del Ficoll, Autoría Laboratorio CREA 57 Ilustración 18: Esquema de referencia para diferenciar las capas después del Ficoll, Autoría Propia 57 Ilustración 19: Imagen de referencia del resultado óptimo después de la centrifugación, Autoría Laboratorio CREA 58 Ilustración 20: IFI, SPC 91 Ilustración 21: IFI: COVID Agudo 91 Ilustración 22: IFI, Control estimulado con PMA 91 Ilustración 23: IFI, Control sin estimular 91	spa
dc.format.extent	94p.
dc.format.mimetype	application/pdf
dc.identifier.uri	https://repositorio.universidadmayor.edu.co/handle/unicolmayor/7362
dc.language.iso	spa
dc.publisher	Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca
dc.publisher.faculty	Facultad de Ciencias de la Salud
dc.publisher.place	Bogota
dc.publisher.program	Bacteriología y Laboratorio Clínico
dc.relation.references	Hu B, Guo H, Zhou P, Shi Z-L. Characteristics of SARS-CoV-2 and COVID-19. Nat Rev Microbiol [Internet]. 2021;19(3):141–54. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1038/s41579-020-00459-7
dc.relation.references	Puntando a posibles impulsores de COVID-19: trampas extracelulares de neutrófilos. Journal of Experimental Medicine. 2020;217(6).
dc.relation.references	Pilsczek FH, Salina D, Poon KKH, Fahey C, Yipp BG, Sibley CD, et al. A novel mechanism of rapid nuclear neutrophil extracellular trap formation in response to Staphylococcus aureus. J Immunol [Internet]. 2010;185(12):7413–25. Disponible en: http://dx.doi.org/10.4049/jimmunol.1000675
dc.relation.references	Monsalve DM, Acosta-Ampudia Y, Acosta NG, Celis-Andrade M, Şahin A, Yilmaz AM, et al. NETosis: A key player in autoimmunity, COVID-19, and long COVID. J Transl Autoimmun [Internet]. 2025;10(100280):100280. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.jtauto.2025.100280
dc.relation.references	Brinkmann V, Reichard U, Goosmann C, Fauler B, Uhlemann Y, Weiss DS, et al. Neutrophil extracellular traps kill bacteria. Science [Internet]. 2004;303(5663):1532–5. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1126/science.1092385
dc.relation.references	Soheili M, Khateri S, Moradpour F, Mohammadzedeh P, Zareie M, Mortazavi SMM, et al. The efficacy and effectiveness of COVID-19 vaccines around the world: a mini-review and meta-analysis. Ann Clin Microbiol Antimicrob [Internet]. 2023;22(1):42. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1186/s12941-023-00594-y
dc.relation.references	Delorey TM, Ziegler CGK, Heimberg G, Normand R, Yang Y, Segerstolpe Å, et al. COVID-19 tissue atlases reveal SARS-CoV-2 pathology and cellular targets. Nature [Internet]. 2021 [citado el 25 de abril de 2025];595(7865):107–13. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41586-021-03570-8
dc.relation.references	Garrido FI, Zaror LC, Lara NI, Zúñiga CN. El rol de las Trampas Extracelulares de Neutrófilos en pacientes con Covid-19. RBAC [Internet]. 2023;55(4). Disponible en: http://dx.doi.org/10.21877/2448-3877.202300144
dc.relation.references	Barnes BJ, Adrover JM, Baxter-Stoltzfus A, Borczuk A, Cools-Lartigue J, Crawford JM, et al. Targeting potential drivers of COVID-19: Neutrophil extracellular traps. J Exp Med [Internet]. 2020;217(6). Disponible en: http://dx.doi.org/10.1084/jem.20200652
dc.relation.references	Zuo Y, Kanthi Y, Knight JS, Kim AHJ. The interplay between neutrophils, complement, and microthrombi in COVID-19. Best Pract Res Clin Rheumatol [Internet]. 2021;35(1):101661. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.berh.2021.101661
dc.relation.references	de Vries F, Huckriede J, Wichapong K, Reutelingsperger C, Nicolaes GAF. The role of extracellular histones in COVID-19. J Intern Med [Internet]. 2023;293(3):275–92. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1111/joim.13585
dc.relation.references	Krinsky N, Sizikov S, Nissim S, Dror A, Sas A, Prinz H, et al. NETosis induction reflects COVID-19 severity and long COVID: insights from a 2-center patient cohort study in Israel. J Thromb Haemost [Internet]. 2023;21(9):2569–84. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.jtha.2023.02.033
dc.relation.references	Post COVID-19 condition (Long COVID) [Internet]. Who.int. [citado el 25 de abril de 2025]. Disponible en: https://www.who.int/europe/news-room/fact-sheets/item/post-covid-19-condition
dc.relation.references	Koc y colaboradores. HC. COVID prolongado y su manejo. Revista Internacional de Ciencias Biológicas. 2022;18(12):4768-4780.
dc.relation.references	Rojas-Valles EU, Magaña-González CA, Herrera-Barrios MT. ¿Los neutrófilos como células de defensa? Inmunobiología y fisiopatología en las enfermedades infecciosas respiratorias humanas. Neumol Cir Torax [Internet]. 2023 [citado el 25 de abril de 2025];82(3):162–73. Disponible en: https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0028-37462023000300162
dc.relation.references	Yam-Puc JC. Trampas extracelulares de neutrófilos (NET), consecuencia de un suicidio celular. Gaceta Médica de México. :68–75.
dc.relation.references	Papayannopoulos V. Neutrophil extracellular traps in immunity and disease. Nat Rev Immunol [Internet]. 2018 [citado el 25 de abril de 2025];18(2):134–47. Disponible en: https://www.nature.com/articles/nri.2017.105
dc.relation.references	Janiuk K, Jabłońska E, Garley M. Significance of NETs formation in COVID-19. Cells [Internet]. 2021;10(1):151. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3390/cells10010151
dc.relation.references	Zuo Y, Yalavarthi S, Shi H, Gockman K, Zuo M, Madison JA, et al. Neutrophil extracellular traps in COVID-19. JCI Insight [Internet]. 6 2020;5(11). Disponible en: https://insight.jci.org/articles/view/138999
dc.relation.references	Favor OK, Pestka JJ, Bates MA, Lee KSS. Centrality of myeloid-lineage phagocytes in particle-triggered inflammation and autoimmunity. Front Toxicol [Internet]. 2021;3:777768. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/ftox.2021.777768
dc.relation.references	Lcznilycnz F. El rol de las Trampas Extracelulares de Neutrófilos en pacientes con Covid-19. Revista RBAC. :245–65.
dc.relation.references	El rol de las Trampas Extracelulares de Neutrófilos en pacientes con Covid-19 [Internet]. Revista RBAC. 2024 [citado el 25 de abril de 2025]. Disponible en: https://www.rbac.org.br/artigos/el-rol-de-las-trampas-extracelulares-de-neutrofilos-en-pacientes-con-covid-19/
dc.relation.references	Santos-López G, Cortés-Hernández P, Vallejo-Ruiz V, Reyes-Leyva J. SARS-CoV-2: generalidades, origen y avances en el tratamiento. Gac Med Mex [Internet]. 2021 [citado el 25 de abril de 2025];157(1):88–93. Disponible en: https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0016-38132021000100088
dc.relation.references	Rosazza T, Warner J, Sollberger G. NET formation - mechanisms and how they relate to other cell death pathways. FEBS J [Internet]. 2021;288(11):3334–50. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1111/febs.15589
dc.relation.references	Yang H, Biermann MH, Brauner JM, Liu Y, Zhao Y, Herrmann M. New insights into neutrophil extracellular traps: Mechanisms of formation and role in inflammation. Front Immunol [Internet]. 2016;7:302. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fimmu.2016.00302
dc.relation.references	Llaveta GA, Arandia-Guzmán J. SARS-CoV-2: estructura, replicación y mecanismos fisiopatológicos relacionados con COVID-19. Gac médica boliv [Internet]. 2020 [citado el 25 de abril de 2025];43(2):170–8. Disponible en: http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1012-29662020000200009
dc.relation.references	Quesada JA, López-Pineda A, Gil-Guillén VF, Arriero-Marín JM, Gutiérrez F, Carratala-Munuera C. Período de incubación de la COVID-19: revisión sistemática y metaanálisis. Rev Clin Esp (Barc) [Internet]. 2021;221(2):109–17. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.rce.2020.08.005
dc.relation.references	Bouza E, Cantón Moreno R, De Lucas Ramos P, García-Botella A, García-Lledó A, Gómez-Pavón J, et al. Síndrome post-COVID: Un documento de reflexión y opinión. Rev Esp Quimioter [Internet]. 2021;34(4):269–79. Disponible en: http://dx.doi.org/10.37201/req/023.2021
dc.relation.references	Kaplan MJ, Radic M. Neutrophil extracellular traps: double-edged swords of innate immunity. J Immunol [Internet]. 2012;189(6):2689–95. Disponible en: http://dx.doi.org/10.4049/jimmunol.1201719
dc.relation.references	Vorobjeva NV, Chernyak BV. NETosis: Molecular mechanisms, role in physiology and pathology. Biochemistry (Mosc) [Internet]. 2020;85(10):1178–90. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1134/S0006297920100065
dc.relation.references	Rueda Barragán FE, Jara González FE, Vélez-Páez JL. Trampas extracelulares de neutrófilos (NETs) y COVID-19: revisión de la literatura científica. Rev Chilena Infectol [Internet]. 2024;41(4):513–22. Disponible en: http://dx.doi.org/10.4067/s0716-10182024000400135
dc.relation.references	Huckriede J, Anderberg SB, Morales A, de Vries F, Hultström M, Bergqvist A, et al. Evolution of NETosis markers and DAMPs have prognostic value in critically ill COVID-19 patients. Sci Rep [Internet]. 2021;11(1):15701. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1038/s41598-021-95209-x
dc.relation.references	Forero Argüello H, Hernández Martínez A, Lobo Moncada D, García Bohórquez DF, Fajardo Rivera JE. Caracterización y fisiopatología del Sars-Cov-2, Revisión de la literatura actual. Rev médicas UIS [Internet]. 2021;34(2). Disponible en: http://dx.doi.org/10.18273/revmed.v34n2-2021006
dc.relation.references	Blanch-Ruiz MA, Ortega-Luna R, Gómez-García G, Martínez-Cuesta MÁ, Álvarez Á. Role of neutrophil extracellular traps in COVID-19 progression: An insight for effective treatment. Biomedicines [Internet]. 2021;10(1):31. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3390/biomedicines10010031
dc.relation.references	Vista de La “niebla mental”, una manifestación neurocognitiva del síndrome post-COVID-19 [Internet]. Sld.cu. [citado el 25 de abril de 2025]. Disponible en: https://revmedmilitar.sld.cu/index.php/mil/article/view/2463/2206
dc.relation.references	Camicia G, de Larrañaga G. Trampas extracelulares de neutrófilos: un mecanismo de defensa con dos caras. Med Clin (Barc) [Internet]. 2013;140(2):70–5. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.medcli.2012.04.022
dc.relation.references	Shafqat A, Omer MH, Albalkhi I, Alabdul Razzak G, Abdulkader H, Abdul Rab S, et al. Neutrophil extracellular traps and long COVID. Front Immunol [Internet]. 2023;14:1254310. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fimmu.2023.1254310
dc.relation.references	Joshi MB, Kamath A, Nair AS, Yedehali Thimmappa P, Sriranjini SJ, Gangadharan GG, et al. Modulation of neutrophil (dys)function by Ayurvedic herbs and its potential influence on SARS-CoV-2 infection. J Ayurveda Integr Med [Internet]. 2022;13(1):100424. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.jaim.2021.03.006
dc.relation.references	Li J, Zhang K, Zhang Y, Gu Z, Huang C. Neutrophils in COVID-19: recent insights and advances. Virol J [Internet]. 2023;20(1). Disponible en: http://dx.doi.org/10.1186/s12985-023-02116-w
dc.relation.references	Chen R, Sang L, Jiang M, Yang Z, Jia N, Fu W, et al. Longitudinal hematologic and immunologic variations associated with the progression of COVID-19 patients in China. J Allergy Clin Immunol [Internet]. 2020;146(1):89–100. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.jaci.2020.05.003
dc.relation.references	Chiang C-C, Korinek M, Cheng W-J, Hwang T-L. Targeting neutrophils to treat acute respiratory distress syndrome in Coronavirus disease. Front Pharmacol [Internet]. 2020;11:572009. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fphar.2020.572009
dc.relation.references	Liberale L, Holy EW, Akhmedov A, Bonetti NR, Nietlispach F, Matter CM, et al. Interleukin-1β mediates arterial thrombus formation via NET-associated tissue factor. J Clin Med [Internet]. 2019;8(12):2072. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3390/jcm8122072
dc.relation.references	Cavalcante-Silva LHA, Carvalho DCM, Lima É de A, Galvão JGFM, da Silva JS de F, Sales-Neto JM de, et al. Neutrophils and COVID-19: The road so far. Int Immunopharmacol [Internet]. 2021;90(107233):107233. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.intimp.2020.107233
dc.relation.references	Ebrahimi F, Giaglis S, Hahn S, Blum CA, Baumgartner C, Kutz A, et al. Markers of neutrophil extracellular traps predict adverse outcome in community-acquired pneumonia: secondary analysis of a randomised controlled trial. Eur Respir J [Internet]. 2018;51(4):1701389. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1183/13993003.01389-2017
dc.relation.references	Tatsiy O, McDonald PP. Physiological stimuli induce PAD4-dependent, ROS-independent NETosis, with early and late events controlled by discrete signaling pathways. Front Immunol [Internet]. 2018;9:2036. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fimmu.2018.02036
dc.relation.references	Kenny EF, Herzig A, Krüger R, Muth A, Mondal S, Thompson PR, et al. Diverse stimuli engage different neutrophil extracellular trap pathways. Elife [Internet]. 2017;6. Disponible en: http://dx.doi.org/10.7554/eLife.24437
dc.relation.references	Pisareva E, Badiou S, Mihalovičová L, Mirandola A, Pastor B, Kudriavtsev A, et al. Persistence of neutrophil extracellular traps and anticardiolipin auto-antibodies in post-acute phase COVID-19 patients. J Med Virol [Internet]. 2023;95(1):e28209. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1002/jmv.28209
dc.relation.references	Woodruff MC, Bonham KS, Anam FA, Walker TA, Faliti CE, Ishii Y, et al. Chronic inflammation, neutrophil activity, and autoreactivity splits long COVID. Nat Commun [Internet]. 2023 [citado el 25 de abril de 2025];14(1):4201. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41467-023-40012-7
dc.relation.references	Lachowicz-Scroggins ME, Dunican EM, Charbit AR, Raymond W, Looney MR, Peters MC, et al. Extracellular DNA, neutrophil extracellular traps, and inflammasome activation in severe asthma. Am J Respir Crit Care Med [Internet]. 2019;199(9):1076–85. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1164/rccm.201810-1869OC
dc.relation.references	Kessenbrock K, Krumbholz M, Schönermarck U, Back W, Gross WL, Werb Z, et al. Netting neutrophils in autoimmune small-vessel vasculitis. Nat Med [Internet]. 2009;15(6):623–5. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1038/nm.1959
dc.rights	Al consultar y hacer uso de este recurso, está aceptando las condiciones de uso establecidas por los autores.
dc.rights.license	Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
dc.subject.proposal	Nets	spa
dc.subject.proposal	Netosis	spa
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dc.title	Identificación de trampas extracelulares de neutrófilos-nets en pacientes con síndrome post-covid	spa
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