Actividad de unión de la proteína adhesiva relacionada con trombospondina de Plasmodium vivax (PvTRAP) a células HepG2

Ortiz Gordillo, Juliana

dc.contributor.advisor	Arévalo Pinzón, Gabriela
dc.contributor.advisor	Sánchez Mora, Ruth Mélida
dc.contributor.author	Ortiz Gordillo, Juliana
dc.date.accessioned	2021-06-11T21:06:34Z
dc.date.available	2021-06-11T21:06:34Z
dc.date.issued	2019-12
dc.identifier.uri	https://repositorio.universidadmayor.edu.co/handle/unicolmayor/227
dc.description.abstract	La invasion de esporozoitos de Plasmodium spp a hepatocitos humanos representa el primer paso para que se establezca la invasion en el humano, esto ocurre mediante la interacción de proteínas de la superficie del esporozoito y receptores en la superficie del hepatocito. La proteína anónima relacionada con trombospondina de Plasmodium vivax (PvTRAP) es un polipéptido presente en la superficie de esporozoítos, del cual en otras especies de Plasmodium se ha investigado su participación en el proceso de invasión al hepatocito. Esta proteína es conservada en varias especies del género Plasmodium caracterizándose por la presencia de un dominio de repetición de trombospondina tipo I (TSR) y un dominio A similar al Factor von Willebrand (vW). En el presente estudio se amplificaron dos fragmentos del gen pvtrap que codifican para el ectodominio de la proteína PvTRAP y los dominios TSR-vW. Cada producto fue clonado en el vector pFastBac-HT-C y secuenciado mediante la técnica de Sanger, obteniendo por primera vez la secuencia de nucleótidos y aminoácidos de la proteína PvTRAP derivada de la cepa VCG-1. Los clonos recombinantes confirmados fueron utilizados para la obtención de baculovirus recombinantes en células de insecto Sf9. Una alta concentración de stock viral fue utilizada para la expresión de los dos fragmentos recombinantes: PvTRAP y PvTRAP-vW-TSR. El ectodominio PvTRAP se purificó mediante cromatografía de afinidad, se dializó exhaustivamente frente a PBS y se cuantificó. Mediante ensayos de citometría de flujo se encontró que la proteína PvTRAP se unió a la línea celular hepática ATCC HB-8065. Futuros estudios son necesarios para evaluar las regiones mínimas de interacción con el fragmento PvTRAP-vW-TSR. Los resultados de este estudio destacan la capacidad de PvTRAP para interactuar con la célula blanco de P. vivax y pone en evidencia el potencial de esta polipéptido en P. vivax como ha sido mostrado para P. falciparum.	spa
dc.description.tableofcontents	Resumen 9 Introducción 10 1. Antecedentes 11 2. Marco teórico 16 2.1. Generalidades 17 2.2. Epidemiología 17 2.2.1. Malaria a nivel mundial 18 2.2.2. Malaria en Colombia 19 2.3. Ciclo de vida 21 2.3.1. Invasión al hepatocito 22 2.3.2. Invasión al Glóbulo Rojo 23 2.3.3. Ciclo en el mosquito 24 2.4. Sistemas de expresión de proteínas Recombinantes 25 2.4.1. Sistemas de expresión en células de mamífero 26 2.4.2. Sistema de expresión en Baculovirus 27 3. Objetivos 29 4. Metodología 30 4.1. Diseño de cebadores 30 4.2. Amplificación de dos regiones del gen pvtrap por reacción en cadena de la polimerasa 31 4.3. Clonación de los productos amplificados pvtrap y pvtrap-vW-tsr 33 4.3.1. Tratamiento enzimático de los productos amplificados (pvtrap, pvtrap-vW-tsr) y del vector pFASTBac-HT-C 33 4.3.2. Ligación de los genes pvtrap y pvtrap-vW-tsr en el vector pFASTBac-HT-C y transformación en células E. coli TOP10 competentes 33 4.3.3. Análisis de colonias recombinantes mediante PCR y tratamiento enzimático 34 4.4. Generación de bácmidos recombinantes en células E. coli DH10Bac competentes 35 4.4.1. Análisis de los bácmidos recombinantes por PCR 35 4.5. Cultivo de la línea celular de insecto Sf9 36 4.6. Transfección de células de insecto Sf9 con los bácmidos recombinantes 36 4.7. Generación de stocks virales 37 4.8. Extracción de la proteína 38 4.9. Electroforesis en gel de poliacrilamida - dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) 39 4.10. Western Blot 39 4.11. Purificación de la proteína 40 4.12. Diálisis 40 4.13. Ensayo de unión de la proteína rPvTRAP a línea celular hepática ATCC® HB-8065 40 5. RESULTADOS 42 5.1. Generación de los plásmidos recombinantes pFastBac-pvtrap y pFastBac-pvtrap-vW-tsr en células E. coli TOP 10 competentes 42 5.2. Generación de bácmidos recombinantes en células E. coli DH10Bac competentes 48 5.3. Células Sf9 derivadas de Spodoptera frugiperda expresan exitosamente la proteína PvTRAP y PvTRAP-vW-TSR 49 5.4. La rPvTRAP se une a la línea celular hepática ATCC® HB-8065 53 6. Discusión 54 7. Conclusiones 58 8. Referencias 59	spa
dc.format.extent	68p.	spa
dc.format.mimetype	application/pdf	spa
dc.language.iso	spa	spa
dc.publisher	Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca	spa
dc.relation.ispartof	No objeto asociado
dc.rights	Derechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019	eng
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/	spa
dc.title	Actividad de unión de la proteína adhesiva relacionada con trombospondina de Plasmodium vivax (PvTRAP) a células HepG2	spa
dc.type	Trabajo de grado - Pregrado	spa
dc.contributor.researchgroup	Trabajo de grado	spa
dc.coverage.city	Bogotá D.C.
dc.description.degreelevel	Pregrado	spa
dc.description.degreename	Bacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico	spa
dc.description.researcharea	Trabajo de grado	spa
dc.identifier.barcode	60150
dc.publisher.faculty	Facultad de Ciencias de la Salud	spa
dc.publisher.place	Bogotá, Distrito Capital	spa
dc.publisher.program	Bacteriología y Laboratorio Clínico	spa
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