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Caracterización del gen mucA en cepas de Pseudomonas Aeruginosa asociadas a la infección crónica producida en Fibrosis quística

dc.contributor.advisorSánchez Mora, Ruth Mélida
dc.contributor.advisorRomero Calderón, Ibeth Cristina
dc.contributor.authorVélez Lozano, Valeria Andrea
dc.date.accessioned2022-10-25T16:32:39Z
dc.date.available2022-10-25T16:32:39Z
dc.date.issued2022-04
dc.identifier.urihttps://repositorio.universidadmayor.edu.co/handle/unicolmayor/5730
dc.description.abstractPseudomonas aeruginosa es un microorganismo de gran importancia a nivel clínico, se encuentra comúnmente aislado de infecciones asociadas a la atención en salud (IAAS) y también en pacientes con enfermedad de base como la Fibrosis Quística (F.Q). Dicha enfermedad genética es de tipo autosómico recesivo, caracterizada por tener una afectación multisistémica y, a su vez, por presentar acumulación de moco dentro de los pulmones de los pacientes, permitiendo la colonización de un amplio espectro de microorganismos. En el caso del estadio crónico de la infección producida por P. aeruginosa en los pacientes con F.Q, se presentan una gran variedad de mutaciones en el genoma, debido a la exposición prolongada a factores estresores, tales como el ambiente anaerobio producido por el moco, la insuficiencia nutricional, la presencia de altas concentraciones de antibióticos para erradicar la infección y la constante activación de la respuesta inmune encabezada por los neutrófilos y especies reactivas de oxígeno (ROS). Uno de los genes que se encuentra asociado al estadio crónico de la infección en pacientes con F.Q es el gen mucA, el cual en condiciones normales se encarga de controlar la producción del alginato. No obstante, cuando se presenta la mutación, se genera la conversión mucoide de la bacteria. En ese sentido, el objetivo de esta investigación es caracterizar el gen mucA en cepas de Pseudomonas aeruginosa que se encuentran asociadas a la infección crónica producida en fibrosis quística.
dc.description.tableofcontentsINTRODUCCIÓN. 1 Planteamiento del problema 1 Objetivo general .. 2 Objetivos específicos .. 2 Justificación 2 1. ANTECEDENTES 4 2. MARCO REFERENCIAL. 6 2.1 Generalidades microbiológicas de Pseudomonas aeruginosa.. 6 2.2 Importancia a nivel intrahospitalario y enfermedades asociadas a la bacteria . 7 2.2.1 Fibrosis Quística _7 2.2.1.1 Manifestaciones clínicas. 8 2.2.1.2 Diagnóstico . 8 2.3 Infección de Pseudomonas aeruginosa en pacientes en F.Q . 9 2.3.1 Etapas de la infección por P. aeruginosa _9 2.4 Regulación y biosíntesis del alginato. 10 3. DISEÑO METODOLÓGICO 12 3.1 Universo, población, muestra 12 Tipo de investigación_12 Nivel, alcance o enfoque de la investigación _12 Población objeto de estudio _12 Muestra 12 3.2 Técnicas y procedimientos.. 13 3.2.1 Conservación de la muestra clínica 13 3.2.2 Cultivo e identificación de Pseudomonas aeruginosa y Pseudomonas fluorescens _13 3.2.3 Curvas de crecimiento de los aislados clínicos y ATCC 27853 _13 3.2.4 Amplificación del gen mucA mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) 14 3.2.4.1 Extracción de ADN genómico a partir de los aislados clínicos y ATCC 27853 14 3.2.4.2 Cuantificación de ADN de los productos de extracción. 15 3.2.4.3 Búsqueda y comparación de las secuencias nucleotídicas del gen mucA mediante herramientas bioinformáticas 15 3.2.4.3.1 Alineamiento de la secuencia del gen mucA de las cepas Pseudomonas aeruginosa ATCC PAO1 y 27853 y Pseudomonas fluorescens SBW25. 16 3.2.4.4 Diseño de primers 16 3.2.4.5 Amplificación del gen mucA mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) 16 3.2.4.6 Electroforesis en gel de agarosa.. 17 3.2.4.7 Purificación y secuenciación del gen mucA 17 3.2.4.8 Análisis bioinformático de las secuencias obtenidas del gen mucA .. 17 4. RESULTADOS 19 4.1 Cultivo e identificación de aislados clínicos. 19 4.1.1 Perfil de resistencia de los aislados clínicos _20 4.2 Curvas de crecimiento de cepa ATCC 27853 y aislados clínicos .. 21 4.3 Aislamiento del gen mucA por PCR.. 23 4.3.1 Cuantificación y electroforesis del ADN genómico _23 4.3.2 Comprobación de primers forward y reverse in silico mediante herramientas bioinformáticas. _25 4.3.2.1 Alineamiento de las secuencias del gen mucA de las cepas Pseudomonas aeruginosa ATCC PAO1 y 27853 25 4.3.2.2 Alineamiento de secuencia del gen mucA de las cepas Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y Pseudomonas fluorescens SBW25 . 26 4.3.3 Diseño de primers _27 4.3.4 Amplificación del gen mucA por medio de PCR _28 4.4 Purificación y secuenciamiento 29 5. DISCUSIÓN 35 6. CONCLUSIONES 37spa
dc.format.extent54p.spa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.language.isospaspa
dc.rightsDerechos Reservados - Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, 2022spa
dc.rights.urihttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/spa
dc.titleCaracterización del gen mucA en cepas de Pseudomonas Aeruginosa asociadas a la infección crónica producida en Fibrosis quísticaspa
dc.typeTrabajo de grado - Pregradospa
dc.description.notesPseudomonas aeruginosa es un microorganismo de gran importancia a nivel clínico, se encuentra comúnmente aislado de infecciones asociadas a la atención en salud (IAAS) y también en pacientes con enfermedad de base como la Fibrosis Quística (F.Q). Dicha enfermedad genética es de tipo autosómico recesivo, caracterizada por tener una afectación multisistémica y, a su vez, por presentar acumulación de moco dentro de los pulmones de los pacientes, permitiendo la colonización de un amplio espectro de microorganismos. En el caso del estadio crónico de la infección producida por P. aeruginosa en los pacientes con F.Q, se presentan una gran variedad de mutaciones en el genoma, debido a la exposición prolongada a factores estresores, tales como el ambiente anaerobio producido por el moco, la insuficiencia nutricional, la presencia de altas concentraciones de antibióticos para erradicar la infección y la constante activación de la respuesta inmune encabezada por los neutrófilos y especies reactivas de oxígeno (ROS). Uno de los genes que se encuentra asociado al estadio crónico de la infección en pacientes con F.Q es el gen mucA, el cual en condiciones normales se encarga de controlar la producción del alginato. No obstante, cuando se presenta la mutación, se genera la conversión mucoide de la bacteria. En ese sentido, el objetivo de esta investigación es caracterizar el gen mucA en cepas de Pseudomonas aeruginosa que se encuentran asociadas a la infección crónica producida en fibrosis quísticaspa
dc.description.degreelevelPregradospa
dc.description.degreenameBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínicospa
dc.publisher.facultyFacultad de Ciencias de la Saludspa
dc.publisher.placeBogotáspa
dc.publisher.programBacteriología y Laboratorio Clínicospa
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dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/closedAccessspa
dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)spa
dc.subject.proposalAeruginosaspa
dc.subject.proposalFibrosis Quísticaspa
dc.subject.proposalGen mucAeng
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fspa
dc.type.coarversionhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85spa
dc.type.contentTextspa
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dc.rights.coarhttp://purl.org/coar/access_right/c_14cbspa


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